羧酸盐结构分析-脂肪酰化缩多氨基酸盐

脂肪酰化缩多氨基酸钠(雷米邦A)结构式如下：

RCO(NHCH₂CO)nNHCH₂COONa

分解蛋白质的肽，聚合度为2～5，作为表面活性剂时，其平衡性认为是很好的。因此，将蛋白质水解至适当的摩尔质量，再与脂肪酸氯化物反应。

此外，还包含有如谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸那样的单氨基酸和脂肪酸氯化物反应物(类似于表面活性剂)。

(一)定性试验

1.试管试验

试样溶解在水中呈碱性，变酚酞为红色。醇溶液中呈中性。

2.缩二脲反应

加50～lOOmg(1～3滴)试样于lml水中，加5滴KOH溶液(450g／L)，充分混合。加热煮沸，冷却后，加入2滴硫酸铜溶液(50g／L)。显蓝紫色～紫红色表示存在蛋白质、聚肽(三肽以上)、β一羟基氨(单乙醇胺等)。这种颜色可能是由于键的氮和铜发生螯合的结果。

3.(水合)茚满三酮反应

在1～2ml试样水溶液中加入lml吡啶，lml抗坏血酸溶液(0.5g／L)和lml水合茚三酮溶液(10g/L)，在沸水浴上加热25min，冷却后，剧烈振荡，红色消失呈紫色。由于存在端位游离α一氨基，因而α一氨基酸、伯氨、氨也显色。

4.IR光谱检定

从结构上考虑，存在着羧基离子和酰氨基的特征吸收。羧基离子在1600～1550cm^-1出现C—O非对称伸缩振动，在1430～1410cm^-1附近出现C=0的对称伸缩振动的吸收，酰氨基在1570～1515cm^-1的NH变角振动和C—N伸缩振动与在1680-1630cm^-1的C=O伸缩振动呈联合吸收，而这些吸收带相互接近，由于重叠，所以难以明确检定(图1)。

图1蛋白分解氨基酸一脂肪酸缩合物的红外吸收光谱(薄膜法)

若只有羧基(将试样转换成酸的形式)，因为吸收移至l700cm^-1附近，可以确认出来。

5.薄层色谱检定

(1)薄层Kieselgel F一254(Merck公司制)，厚0.25mm。

(2)展开溶剂正丁醇一醋酸.水(4：1：2，体积分数)以及水饱和正丁醇。

(3)显色方法  将已展开之薄层干燥，在由漂白粉和浓盐酸发生的氯雾气中进行N一氯化。再吹进冷风以挥发吸附的氯，轻轻地喷雾乙醇，干燥1～2min，喷雾碘化钾淀粉液。含有NH基的表面活性剂生成紫色斑点。现将上述条件下展开的R_f列于表2中。

表2 N-酰化氨基酸盐的Rf值和发色度

①三乙醇胺的斑点。

②展开溶剂(A)  正丁醇-醋酸一水(4：1：2，V／V)。

③展开溶剂(B)  水饱和正丁醇。

④发色度M～中等程度的发色；W一弱的发色；VW一非常弱的发色；N一没有发色。

对于N-长链酰化谷氨酸，即使氨基的链长以及反离子不同，R_f值几乎不变。随着氨基酸的不同，可以看出R_f值的变化，检出极限约0.5μg。

(二)结构分析

1.亲油基的分析

将约2g的试样和50ml盐酸(1+1)一起煮沸6h以上。冷却，加入等量的乙醇(95％)，每次用50ml石油醚萃取3～4次。合并石油醚，充分水洗至甲基橙指示剂呈中性。加入无水硫酸钠脱水，过滤，在热水浴上蒸馏回收石油醚，得到脂肪酸。

将这样得到的脂肪酸按脂肪酸盐结构分析中叙述的甲酯化方法甲酯化，然后按相同的条件作气相色谱分析。

2.亲水基的分析

(1)水解  为了分析亲水基，必须破坏氨基酸，在水解肽键时，用相当于试样100～150倍的盐酸溶液[c(HCl)=6mol／L]，在110℃的封闭管中，或者在装有回流冷凝器的烧瓶中在135～140℃的油浴中加热20h，分解产物经萃取除去脂肪酸后，浓缩除去盐酸。

(2)用气相色谱分离定量  得到的氨基酸混合物用离子交换色谱，纸色谱，或者气相色谱分离定量，在进行气相色谱操作中，作了将氨基酸变成挥发性衍生物的必要性的种种考察。图3表示氨基酸的N-三甲基硅-三甲基硅醚衍生物的气相色谱。用玻璃层析柱硅系固定相分析。

图3 氨基酸的N-三甲基硅-三甲基硅醚衍生物的气相色谱1一丙氨酸；2一甘氨酸；

3一缬氨酸；4一亮氨酸；5一异亮氨酸；6一谷氨酸；7一苯基丙氨酸层析柱 

硅油(30％)／Sterehamol(红色耐火砖载体，德国SW产)(2.8m)。温度l65℃。