(一)试剂
(1)亚甲基蓝溶液将6．8g浓硫酸暖纛地注入约50ml水中，待冷却话加亚甲基蓝0.03g和无水硫酸钠50g，溶解后加水稀释至1L。
(2)0．5g／L阴离子表面活性剂溶液。
(3)氯仿。
(二)操作步骤
在带塞试管中加入3m1亚甲基蓝溶液和5ml氯仿，加入1滴0．5g／L阴离子表面活性剂溶液，塞上塞子充分振荡，并使其分层，一直滴至上下两层对反射光呈同一颜色为止。一般需要l0～12滴阴离子表面活性剂溶液。接着滴加l9几试样溶液，振荡后让其分层，静置观察两层颜色。
(三)结果和判断
如果氯仿层颜色较深，而水层几乎无色，则表明存在阴离子表面活性剂。因为试剂是酸性的，如果存在肥皂的话，则已经分解成脂肪酸，所以肥皂不能被检出。
如果水层的颜色较深，则表明存在阳离子表面活性剂，因为试剂是酸性的，两性表面活性剂通常呈(微弱的)阳性结果。
如果水层呈乳状，或两层基本呈同一颜色则表明有非离子表面活性剂存在。如果有疑问，可用2ml水代替试样溶液进行对照试验。硝酸盐、磷酸盐等无机盐不会产生干扰。本试验的改良方法是在5m110g／L试样溶液中加入lOml亚甲基蓝溶液和5ml氯仿，将混合物振荡2～3min，然后使其分层，观察两层颜色，若氯仿层呈蓝色的话，则表明存在阴离子表面活性剂。再加入试样溶液，则氯仿层产生更深的蓝色。
