洗洁精对人皮肤纤维细胞损伤刺激的研究

洗洁精对人皮肤纤维细胞损伤刺激的研究

李梅¹，郭洪砷¹，黄晓明¹，张进²

(1．安利(中国)研发中心，上海200021;2．复旦大学上海医学院，上海200032)

摘要：借助人体皮肤纤维细胞损伤刺激实验，通过MTT显色图和细胞结晶紫染色图分析了洗洁精对人体皮肤的影响。

关键词：洗洁精；皮肤；刺激性；人皮肤成纤维

中图分类号：TQ649    文献标识码：A    文章编号：1006-7264( 2010)11-0029-02

洗洁精为日常消费用品。安利公司生产的浓缩型洗洁精是一种高效的去污和去油产品。它可以应用于所有餐具以及水果蔬菜的清洗，专利的“三元洗涤系统”（融合3种特殊的表面活性剂，迅速溶解顽固污垢）使其溶解污垢的效果奇佳。作为一种生活中常用的消费品，洗洁精的使用安全性也是大家关注的问题之一。安利浓缩型洗洁精含有芦荟和椰子油衍生物，性质温和，使用中可起到保护双手的功效。本实验将以人体皮肤成纤维细胞作为模型，对比分析安利浓缩型洗洁精对皮肤的影响。

1实验材料与方法

1.1材料

人皮肤成纤维细胞为原代培养细胞，上海肯强仪器有限公司；MTT [3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐]，sigma公司；其他试剂均国产。

1.2人皮肤成纤维细胞培养

早代人皮肤成纤维细胞，上海肯强仪器有限公司；5％（体积分数）CO₂培养，培养基为含有10％（体积分数）胎牛血清的高糖DMEM(购自Gibco)；传代消化使用0.1％胰酶。

1.3对人皮肤成纤维细胞的刺激

使用安利公司的浓缩型洗洁精以及其他公司同类产品B和D，以刺激体积分数为0.200％为基准，按照同等去污力原则稀释安利浓缩洗洁精，得到4个不同浓度样品(Al，A2，A3和A4)。将早代人皮肤成纤维消化后传于96孔板中(每孔5.0×l04个细胞，第2天细胞密度约为80％)。吸弃培液后，分别加入各浓度洗洁精稀释液100μL，作用5min后，吸弃稀释液，加入100μL DMEM完全培液，24 h后测定MTT值。或使用各稀释液作用12 h后，直接镜下或结晶紫染色后观测细胞形态。

1.4 MTT检测

每孔(含有100μL DMEM)加入10μL MTT反应液(质量浓度为5g／L，溶于磷酸盐缓冲液PBS)，置于CO₂培养箱中，4h后弃培液，加入100μL DMSO（二甲基亚砜），避光温和摇动20 min后，使用Spectra Max M5多功能酶标仪测OD490吸光值。

1.5结晶紫染色

吸弃培液，PBS洗一遍，冰上甲醇固定2 min，加入质量浓度为0.2 g／L的结晶紫染液固定细胞15 min，吸弃染液，用蒸馏水洗细胞3次，可见光下观察细胞状态。

2试验结果及讨论

各稀释液短时间作用于人皮肤成纤维细胞5 min，24 h后使用MTT检测细胞（见图1），以分析短时间作用，对皮肤成纤维细胞活力的影响。对细胞存活率的检测结果显示，与同类产品B和D对比，安利浓缩洗洁精同等去污力样品，对细胞活力的影响明显弱很多。这表明，与其他品牌洗涤剂相比，在同等去污力并短时间刺激条件下，安利洗洁精对皮肤成纤维细胞的损失明显弱很多。其中，稀释液A4样品几乎对细胞无损伤（图2）。

为了分析较长时间对皮肤成纤维细胞的作用，试验分别使用各稀释液较长时间作用于细胞12 h。作用后发现，同类产品引起皮肤成纤维细胞大面积死亡（见图3）。

进一步细胞结晶紫染色显示相同结果（见图4）。洗洁精是日常用品，在对高效去污去垢效能的同时，其对皮肤的刺激性也为广大消费者所关心。为此，对比其他同类产品，检测了安利浓缩洗洁精在短时间和长时间两种作用方式下，对皮肤成纤维细胞的影响。

结果显示，在同等去污能力下，安利浓缩洗洁精对皮肤成纤维细胞的影响明显小于其他同类产品。而在较长时间的作用下，安利浓缩洗洁精对皮肤成纤维细胞的低损伤作用进一步显示出来，例如安利洗洁精A3稀释液长时间对细胞几乎没有损伤作用。