1引言
安乃近,化学名为[(1,5-二甲基-2-苯基-3-氧代-2,3-二氢-1H-4吡唑-4基)甲氨基]甲烷磺酸钠盐一水合物,是一种应用广泛的解热镇痛药。安乃近的测定方法有滴定法､分光光度法､电化学分析法､荧光分析法､高效液相色谱法以及化学发光法。
在一定条件下安乃近的浓度与化学发光强度成正比。本文发现表面活性剂聚乙烯吡咯烷酮K30对安乃近与罗丹明6G的化学发光有较大的增强作用。该体系没有采用任何氧化剂如KMnO4､H2O2､I2､Ce(IV)等,避免了氧化剂对光信号吸收和产生高背景而引起误差。表面活性剂聚乙烯吡咯烷酮K30在此体系中的应用,也为其化学发光机理的探讨提供了一定依据。
2.1仪器与试剂
IFIS-D型智能流动注射发光仪(西安瑞科电子设备有限公司)。图1为流动注射化学发光法测定安乃近的流程示意图。
通过一个六通阀完成进样,样品与试剂混合溶液流经反应池,反应产生的光信号被光电倍增管放大,由检测器进行检测(操作电压为900V),最后将信号传送到计算机中进行数据处理。
所用试剂除特别指明者外均为分析纯,水为二次蒸馏水。安乃近对照品由中国药品生物制品检定所提供,安乃近针剂､片剂由药店购买。
2.2标准品与样品制备
标准品准确称取50mg安乃近标准品,用二次蒸馏水定溶于50mL棕色容量瓶中,然后准确移取不同体积标准储备液加以稀释,得到不同浓度系列的标准安乃近溶液。
样品对于片剂,取安乃近20片,准确称重求,得每片的平均重量,然后对安乃近片剂进行研磨,分散均匀后准确称取50mg置于50mL棕色容量瓶中,用二次蒸馏水定溶,最后经超声波震荡混和均匀。准确移取不同体积储备液加以稀释,所测样品浓度应在工作曲线范围内。对于针剂,直接稀释2.00mL针剂安乃近,使样品浓度在工作曲线范围内即可。
无论是片剂样品还是针剂样品,均应在1小时内配制并完成测定。
3.1最佳条件选择
3.1.1聚乙烯吡咯烷酮K30浓度
表面活性剂聚乙烯吡咯烷酮K30对光信号有一定的增强作用,我们对聚乙烯吡咯烷酮K30浓度与发光信号的关系进行了详细的研究,发现光信号随着聚乙烯吡咯烷酮K30浓度的不同而发生变化。
将聚乙烯吡咯烷酮K30的浓度从0开始逐渐增加,浓度为0.05%(W/V)时光信号最大,大于或小于此浓度光信号均有所减小,见图2。为此,选择聚乙烯吡咯烷酮K30的最佳浓度为0.05%(W/V)。
3.1.2罗丹明6G浓度
考察了不同荧光试剂对光信号的影响,结果见表1。从表中数据可以看出,罗丹明类荧光试剂均可使光信号有所增加,但罗丹明6G增加最多。
罗丹明6G浓度对光信号的影响见图3。
开始时光信号随着罗丹明6G浓度增大而增大,当浓度为0.075mmol/L时,光信号达到最大,之后光信号又随着浓度的增大而减小。故实验中选择罗丹明6G的浓度为0.075mmol/L。
3.1.3硫酸浓度化学发光信号的大小与硫酸的浓度有很大的关系。硫酸浓度对光信号的影响见图4。
当硫酸浓度为0.2mol/L时,光信号最大,此后,硫酸浓度再增加时,光信号不再发生变化。故选择硫酸的浓度为0.2mol/L。
3.1.4试剂混合溶液流速
罗丹明6G与聚乙烯吡咯烷酮K30试剂混合溶液的流速对光信号的大小也有影响,开始阶段流速增加光信号也增加,但当流速增加到3mL/min以上时,光信号几乎不再发生变化,见图5。所以本实验选择试剂混合溶液的流速为3mL/min。
3.1.5安乃近稳定性
安乃近水溶液在空气中放置不太稳定,不稳定程度取决于温度､pH值､光线照射以及痕量金属的存在等。将一定浓度安乃近水溶液放置不同时间,测其光信号,结果见图6。放置时间在1小时内光信号基本稳定。所以,安乃近水溶液应在棕色容量瓶中配制和储存,并尽量一次配制,测定在1小时内完成。
3.2干扰研究
用0.8μg/mL的安乃近,对常用赋形剂和添加剂,如淀粉､硬脂酸镁､糊精､葡萄糖､果糖､HCO3､HPO4等,进行干扰实验。当它们的浓度为1mmol/L时几乎不产生干扰,相对误差均在5%以内,结果见表2。
有机试剂几乎不能增强光信号,所以实验中不采用有机溶剂。
3.3线性范围及检出限
在最佳实验条件下,在0.2～10.0μg/mL范围内安乃近浓度与化学发光强度成线性关系,回归方程为I=55.4C+3.3,r=0.998,检出限为0.08μg/mL。
4样品测定
应用本法对安乃近针剂和片剂进行测定,并与紫外分光光度法相比较,两种方法测定结果基本一致。另外,为了进一步证明本法测定的可靠性,向每一样品中加入已知量的安乃近标准品进行了回收检验。测定结果见表4。
5机理探讨
根据以前报道的相关发光机理推测,该体系的发光是由于空气中的氧起到了氧化剂的作用,使安乃近氧化并产生微弱的化学发光。在聚乙烯吡咯烷酮K30存在下,罗丹明6G对光信号产生增敏作用,从而使光信号增强。
6结论
表面活性剂聚乙烯吡咯烷酮K30在安乃近化学发光测定中的应用具有重要意义。以前的报道只有吐温系列可用于此体系,聚乙烯吡咯烷酮K30的应用开阔了研究的领域,有助于寻找能使测定灵敏度更高的表面活性剂,深入探讨表面活性剂在此体系中的作用机理。
