疏水作用色谱是70年代兴起的一种新型的纯化分离模式,目前已成为分离纯化生物大分子的有效手段之一[1,2]｡疏水作用色谱填料对色谱分离效果至关重要｡球状交联聚乙烯醇(PVA)作为疏水作用色谱固定相具有一定的机械强度,能承受较高的柱压,有良好的化学稳定性,不溶于水及有机溶剂,不受微生物影响,pH值使用范围广且与生物大分子有很好的相容性｡因此,以聚乙烯醇为基质的固定相是一种新型高效的疏水作用色谱固定相,可应用于高效液相色谱,分离､纯化生物活性蛋白质等大分子物质,是今后疏水色谱填料的一个发展方向｡
球状聚乙烯醇颗粒的制备是球状聚乙烯醇疏水作用色谱固定相制备的关键之一｡笔者对PVA水溶液含量､甲醛用量､表面活性剂配伍和用量､油水体积比､反应温度及搅拌速度等工艺影响因素进行了研究和探索,以聚乙烯醇为原料采用悬浮聚合法成功地制备了具有一定机械强度､粒度和孔径的球状交联聚乙烯醇颗粒｡
1 实验
1.1 主要仪器和试剂
仪器:数字温度控制仪(上海医用仪表厂),增力电动搅拌机(上海标本模型厂),标准磨口玻璃仪器｡试剂:PVA19-99(工业品,广西维尼纶集团公司),其余甲醛､span-80､碘､硫酸､亚硫酸氢钠和油酸钠均为AR级化学试剂｡
1.2 球状交联聚乙烯醇的制备
将溶解好的聚乙烯醇､一定量的表面活性剂和变压器油注入500ml的三口烧瓶中,调节水浴温度为88~
1.3 缩醛化度的测定[3]
将干燥球粒在硫酸溶液中加热蒸馏,用NaH-SO3溶液吸收甲醛,以淀粉溶液作指示剂,碘酒溶液进行滴定｡
2结果与讨论
2.1 水溶液中聚乙烯醇含量与成球的关系
水溶液中聚乙烯醇含量对成球有着重要的影响｡当PVA含量较低时,水分含量较大,随着水分的大量蒸发,易形成结构松散､机械强度低的球粒;PVA含量较高时,粘度大,分散困难,容易结块,固定其它优惠条件(下同)对水溶液中PVA的含量与成球质量的关系进行了观察,有关实验结果列于表1｡结果表明水溶液PVA含量以15%为好｡
2.2 表面活性剂与成球的关系
在反应体系中加入适当的表面活性剂,可以调节PVA浆料和油相间界面张力的大小｡将非离子型表面活性剂与离子型表面活性剂联合使用时,两者交替地被吸附在分散液滴表面上,形成了坚实的界面膜,从而提高了乳化液的稳定性｡经过反复实验,采用油酸钠和span-80联合使用效果最好(见表2)｡
2.3 甲醛用量与成球的关系
甲醛的用量直接影响着缩醛反应的进行｡当缩醛化度为30%时,颗粒有较好的机械强度和硬度,也有利于后面功能化反应的进行｡在优惠条件下进行悬浮聚合,缩醛化度与甲醛用量的关系如附图｡附图 缩醛化度与甲醛用量的关系
2.4 油水体积比､搅拌速度与成球的关系
油水体积比和搅拌速度太小,聚乙烯醇浆料难以被完全分散,聚乙烯醇液滴容易重新粘合在一起｡随着油水比和转速增大,液滴之间碰撞的几率较少,可以获得比较均匀的球状颗粒｡实验所得颗粒粒径的分布与油水体系比及搅拌速度的关系如表3所示｡
2.5 温度的选择
缩醛化反应温度升高，有利于加快反应速度，但温度太高，体系粘度下降，聚乙烯醇液滴碰撞几率增加，有絮凝胶产生。当反应为
3 结论
本实验对球状交联聚乙烯醇制备的工艺条件进行了探索｡将50ml15%的聚乙烯醇水溶液分散在300ml的变压器油中,加入
参考文献:
[1] W Noppe, I Hansses, M De Cuyper. Simple two –step procedure for preparation of highly active pure equine milk lysozy me[J]. J Chromatogr A,1996,719:327~331.
[2] 白泉,卫引茂,耿信笃.胍变及脲变α 淀粉酶的研究[J] 色谱,1997,15(4):284~287.
[3] 邹洲平.聚乙烯醇缩甲醛胶中游离甲醛测定方法探讨[J] 新疆化工,1999,1:49~50.
[4] 朱和辉.苯基聚乙烯醇疏水色谱填料的制备及其在大分子分离中的应用[D] 华南理工大学硕士论文,1999:21.
